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Clonación y caracterización parcial de la región génica que codifica para la proteína enlazante de sulfato de heparina (HSBP) de 71.5 kDa de Helicobacter pylori
CLAUDIA CELINA LÓPEZ BOLAÑOS
FELIPE DE JESUS ASCENCIO VALLE
EDUARDO RUIZ BUSTOS
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
Helicobacter pylori, adhesión, proteína, secuencias
adhesion, protein, sequences
"Helicobacter pylori es un importante patógeno gástrico del humano, que posee una variedad de factores de adhesión con afinidad por receptores glicosídicos de la mucosa gástrica, uniéndose a ellos como mecanismo inicial de la colonización, por lo que a éstas moléculas se les ha considerado como excelentes candidatas para la construcción de vacunas genéticas. En trabajos previos, realizados en el Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, se han identificado adhesinas de H. pylori asociadas a membrana celular, entre las que se encuentra la proteína de 71.5 kDa. La clonación de la secuencia parcial que codifica la proteína de 71.5 kDa que reconoce sulfato de heparina (HSBP71.5), se realizó mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), usando como templado ADN genómico y oligos diseñados a partir de la secuencia de aminoácidos de péptidos internos generados mediante digestión parcial con tripsina, a partir de la proteína pura. Los productos de PCR fueron ligados al vector de clonación pGemT-easy, con el que se transformó Escherichia coli DH5mediante shock térmico. El ADN plasmídico se obtuvo por el método de lisis alcalina. La titulación y el tamizado de la librería genómica se llevó a cabo utilizando como sonda la secuencia clonada. De la secuenciación de clonas positivas se obtuvieron dos secuencias parciales de 741 y 774 pb respectivamente. La primera secuencia mostró similitud parcial del 37% con proteínas que reconocen a penicilina (PBPs), mientras que la segunda presentó una homología del 36% con proteínas que corresponden a una subunidad de proteasa clp dependiente de ATP. El análisis de proteínas realizado sobre el genoma de H. pylori en las cepas 26695 y J99 del Gen Bank, reveló que el gen hsbp71.5 puede situarse alrededor de los genes que codifican la PBPs y clp-proteasa, por lo que en estudios futuros se diseñarán primers para amplificar la secuencia completa del gen."
"Helicobacter pylori is an important gastric pathogen of humans. It possesses a variety of adhesion factors that recognizes a number of glycosidic receptors on the gastric mucosa, using them to start the colonization process, becoming an excellent candidate for the construction of genetic vaccines. Previous works at the Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste identified a number of cells associated and extracellular proteins among H. pylori strains with affinity for heparan sulfate-proteoglycan (HSBP). One of these heparan sulfate binding protein (HSBP) is a 71.5 kDa adhesin, which is the subject of the present study. Cloning of the gene coding the 71.5 kDa HSBP was performed by polymerase chain reaction (PCR), using genomic DNA as a template and degenerate primers. Primers were designed from the internal peptides generated by partial digestion of the 71.5 HSBP with trypsin. The PCR products were ligated into pGEMT-easy and used to transform Escherichia coli DH5 by thermic shock. Plasmid DNA was obtained by alkali lysis. Screening of the genomic library was performed with the cloned sequence as a probe. Plasmids, with confirmed inserts, were used for sequencing. Two partial sequences of 741 and 774 bp were obtained, the first showed a 37% similarity with a penicillin-binding protein (PBPs) and the second had a 36% homology with a protein that corresponds to an ATP-dependent clp proteolytic subunit. According to sequence analysis of the H. pylori genome from strains 26695 and J99 reported in the Gen Bank, these two genes are flanking the hsbp71.5 gene. Future work will be done to amplify and sequence the complete gene."
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.
2003-07
Tesis de maestría
Español
BACTERIOLOGÍA
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