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Tripsinas de crustáceos: caracterización y modulación
JUAN CARLOS SAINZ HERNANDEZ
FERNANDO LUIS GARCIA CARREÑO
MARTHA PATRICIA HERNANDEZ CORTES
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
Tripsina; tripsinógeno; Penaeus vannamei; caracterización; genotipo; modulación; polimorfismo
Los esfuerzos realizados para entender el sistema digestivo de crustáceos han generado avances importantes. Una buena cantidad de experimentos han sido dirigidos para conocer las condiciones físicas, químicas y biológicas que promueven un mayor aprovechamiento del alimento, un mayor crecimiento, supervivencia y menores costos en la alimentación. En apoyo a estos esfuerzos, en esta tesis se analiza una parte del sistema enzimático, en particular, los eventos postraduccionales y las características de la tripsina que permiten la digestión de proteína en el sistema digestivo del camarón Penaeus vannamei. En este organismo, la tripsina está compuesta por tres isoformas, las cuales fueron estudiadas para conocer si se almacenan como zimógenos y en que células lo hacen, así como las características bioquímicas y cinéticas de cada isoforma, también se estudió el genotipo, la modulación del fenotipo, y las ventajas que presenta cada uno de los fenotipos distribuidos en la población. Las isoformas A, B y C, se almacenan como zimógeno en las células B de la glándula digestiva. En cortes histológicos se observó que las células B son las que vierten su contenido al lumen donde entran en contacto con el quimo. Las tres isoformas fueron aisladas para estudiarlas en forma individual y compararlas entre ellas y tripsinas de diferentes orígenes. La secuencia amino-terminal de las tres isoformas coincide con las secuencias deducidas obtenidas por otros investigadores y confirma que ellas son moléculas diferentes. Las tres glicoproteínas fueron estudiadas para conocer la concentración óptima de calcio, temperatura, pH óptimo de actividad y la actividad residual al incubarse con inhibidores. Las característica cinéticas encontradas, muestran que el KM de las tres isoformas es mucho menor que el de las tripsinas de diferente origen y tienen una mayor eficiencia catalítica. La isoforma C presenta el menor KM y la mayor eficiencia catalítica. Las tres isoformas se distribuyen formando tres fenotipos: fenotipos ABC, BC y AC. Realizando experimentos con cruzas entre individuos de los diferentes fenotipos, se determinó que las tres isoformas son el producto de 2 loci, 1 monomórfico y otro polimórfico con dos alelos [...]
Knowledge of the physical, chemical, and biological conditions of the digestive system of crustaceans has generated important information for promoting better utilization of food for growth and survival of the cultured shrimp. In this thesis further understanding of digestive enzymatic system, in particular the post-translational modifications of digestive trypsins in white shrimp Penaeus vannamei is explored. In Penaeus vannamei, trypsin has three isoforms, which were studied to determine if they are stored as zymogens and in which cells or tissues. Also determined were the kinetic constants of each isoform, isoform genotypes, phenotype modulation, and advantages of having one or another phenotype in an organism. The trypsin isoforms were labeled A, B, and C and were stored as zymogens in B-cells in the digestive gland. Histological analysis revealed that B-cells release their contents into the lumen, where they contact chyme. The isoforms were purified to study their individual characteristics and compare them with trypsins of different origins. The amino-terminus sequences of the three isoforms are identical to the sequences obtained previously. They are glycoproteins by their positive reaction with Schiff reagent and contain N-galactosamine and N-glucosamine. Optimum pH and temperature for the isoforms was determined, as well as the effect of calcium and residual activity when incubated with proteinase inhibitors. Only calcium had a significant effect on proteinase activity. Isoform C required more calcium in the reaction solution than isoforms A and B. The Michaelis constant KM for the three trypsins is lower than the constant for trypsins from other organisms and they have higher catalytic efficiency. Isoform C has the lowest KM and the highest catalytic efficiency. Isoenzyme analyses of individual shrimp show that three phenotypes exist: ABC, AB, and AC. After genetic experiments by mating typed shrimps and after segregation analysis, the three isoforms were determined to be the product of two loci, one monomorphic and the other polymorphic [...]
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.
26-03-2004
Tesis de doctorado
Español
ZOOLOGÍA MARINA
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Aparece en las colecciones: Tesis de Doctorado en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales

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