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Caracterización de proteasas en el sistema digestivo de la langosta roja (Panulirus interruptus)
LAURA EVELIA CELIS GUERRERO
FERNANDO LUIS GARCIA CARREÑO
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
Caracterización; proteasas; crustáceos
Con la caracterización de proteasas digestivas se conocen algunos aspectos bioquímicos de la digestión de proteína. La eficiencia con que los organismos digieren y utilizan los componentes nutritivos depende de la presencia de ciertas enzimas proteolíticas. Conociendo qué clases y tipos se sintetizan, y cómo actúan, se podría diseñar un alimento digerible basado en el conocimiento de la capacidad fisiológica que tienen los organismos. El objetivo de este trabajo fue describir y clasificar las principales proteasas que se encuentran en el sistema digestivo de la langosta roja Panulirus interruptus, así como observar su respuesta a variables físico-químicas. Esto se consiguió utilizando una serie de ensayos enzimáticos en tubo y SDS-PAGE, con sustratos específicos para proteasas de la clase serino e inhibidores específicos para clasificar la acción de proteasas del tipo serino y metalo. Se manejaron variables de pH y temperatura. De acuerdo a los resultados arrojados y a los estudios previos del tema, esta especie de crustáceo cuenta con proteasas digestivas compuestas en su mayoría por la familia serino, con masas moleculares de alrededor de 50 y 20 kDa y una de baja masa molecular (10 kDa). De este grupo de proteasas, la mayoría son del tipo tripsina, encontrando además, actividad del tipo quimotripsina. El rango de estabilidad de estas proteasas a variables físico-químicas fue amplio, siendo en pH, de 5 a 11 y en temperatura, de 10 a 50 ºC con una hora de incubación. Los óptimos de actividad fueron pH 8-9 (en la región alcalina), pH 3 (en la región ácida) y temperatura de 50 ºC, estando estos valores muy por encima de los que se presentan in vivo. Diferencias en la actividad específica por región de la glándula digestiva, así como diferencias intraespecíficas en el patrón enzimático, fueron algunos de los resultados encontrados. La utilización de jugo gástrico para futuros ensayos es una opción, ya que este extracto presentó una mayor actividad por mg de proteína y su obtención no requiere la disección de los organismos que son objeto de estudio.
By characterizing digestive proteases, it is possible to learn some biochemical aspects of protein digestion. The efficiency of organisms to digest and use nutritive components depends on the presence of proteolytic enzymes. Knowing what classes and types of proteases are synthesized and how they work could enable researchers to design feeds based on the physiological capacity of the organism. The purpose of this work was to describe and classify the principal proteases located in the digestive system of the red lobster Palinurus interruptus and to observe their response to physico-chemical variables. To reach this objective, several enzymatic assays in test tubes and SDS-PAGE were performed. To classify the action of metallic and serine proteases, specific substrates and inhibitors were used. In all cases, pH and temperature were measured. According to previous studies, this species mostly uses digestive proteases from the serine family. Most molecular weights were around 20 and 50 kDa, and one with a weight of 10 kDa. Of these proteases, the majority was trypsin-like, but some were chymotrypsin-like. Stability was highest at one hour of incubation at 5 to 11 pH and 10 to 50°C. Enzymatic activity was optimal at 50°C and pH 8 to 9 in the alkaline region and pH 3 in the acid region. These values were obtained in vivo. Based on results for enzymatic activity in the digestive gland, there were significant differences. Finally, interspecific differences of the enzymatic pattern were also found. The use of gastric juice in one attractive option for future assays because of the high level of activity per mg protein, as well as its avoiding sacrifice of the animal.
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.
11-07-2003
Tesis de maestría
Español
ENZIMOLOGIA
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publishedVersion - Versión publicada
Appears in Collections:Tesis de Maestría en Ciencias en Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales

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