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http://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/372| Identificación y secuencia parcial de un peptido presente en la glandula sinusal de Penaeus vannamei (Bonne 1931), reconocido por sueros hiperinmunes diseñados a partir de la hormona inhibidora de las gónadas de crustáceos | |
| Gerardo Alfonso Anguiano Vega | |
| CELIA GLORIA VAZQUEZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| GIH; glándula sinusal; Penaeus vannamei | |
| Partiendo de tres mil organismos juveniles de Penaeus vannamei se obtuvieron seis mil tallos oculares. De ellos se extrajeron por microdisección cuatro mil glándulas sinusales que fueron homogeneizadas y procesadas para obtener su extracto soluble. El extracto fue purificado mediante cromatografía líquida de alta presión en fase reversa, donde se obtuvieron 22 fracciones, las trece fracciones iniciales corresponden a componentes con baja cantidad de proteína y las últimas nueve muestran como componentes principales moléculas de naturaleza peptídica. Las fracciones peptídicas se encuentran parcialmente purificadas al presentar diversos componentes cuando se corrieron en electroforesis desnaturalizante en PAGE-SDS TRIS-tricina. Simultáneamente, basándose en la secuencia de un par de segmentos de la hormona inhibidora de las gónadas (GIH) de Metapenaeus ensis se diseñaron y elaboraron dos péptidos sintéticos, con 18 y 19 residuos de aminoácidos de longitud respectivamente. Estos péptidos fueron usados para inmunizar y obtener sueros policlonales hiperinmunes en ratón y conejo. Después de la segunda inmunización los sueros mostraron anticuerpos específicos contra los antígenos inductores de la respuesta inmune, los cuales presentan reacción cruzada el extracto completo de la glándula sinusal de P. vannamei. En la fracción F18, resultante de la purificación por cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa, mediante técnicas inmunoquímicas (ELISA y Western blot) se detectó un péptido reactivo con los sueros hiperinmunes inducidos usando los péptidos sintéticos, el cual migra electroforéticamente entre las bandas de 14200 y 6500 Da y muestra una masa molecular cercana a los 10000 Da. La secuencia obtenida por degradación de Edman en un secuenciador de aminoácidos automatizado permite identificar seis residuos de aminoácidos correspondientes al segmento aminoterminal de dicho péptido. La secuencia reportada se ordena en la siguiente manera: ser-gly-asp-gly-glu-gly. Aparentemente la secuencia obtenida se encuentra contaminada a juzgar por la elevada cantidad de glicinias encontradas y por presentar baja identidad con los péptidos sintéticos. El escaso número de residuos impide realizar comparaciones en los bancos de datos bioinformáticos. From three thousand of Penaus vannamei young organisms, six thousand eyestalks were extracted. From these, four thousand of sinus glands were extracted by micro-dissection. The sinus glands were homogenized and processed to obtain their soluble extract. The extract was purified by high-pressure liquid chromatography in reverse phase (HPLC-RP), and twenty-two fractions were obtained. The first thirteen fractions were low protein components and the last nine show as main compound molecules of peptide nature. The peptide fractions were partially purified showing several components in denaturing electrophoresis SDS-PAGE-TRIS-tricine. Simultaneously, and based on the sequence from a couple of segments from the gonad inhibiting hormone (GIH) of Metapenaeus ensis, two synthetic peptides were designed and made with 18 and 19 aminoacid residues respectively. These peptides were used to immunize and obtain hype-rimmune policlonal serums in mouse and rabbit. After the second immunization, both serums showed specific antibodies against inductor antigens from the immune response, which show crossed reaction with the complete extract from the P. vannamei sinus gland. The HPLC-RP purified F18 fraction was analyzed by immunochemical techniques (ELISA and Western blotting). From these analyses a reactive peptide was detected. This peptide showed reaction against the hyper-immune serums of the synthetic peptides. When this peptide is run by electrophoresis, it has a migration pattern within 14200 and 6500 Da with a molecular weight near to 10000 Da. The sequence of this peptide obtained by Edman’s degradation in an automatic amino acid sequencer allows us to identify six amino acid residues that belong to the amino terminal end of such peptide. The reported sequence is ordered by the following way: ser-gly-asp-gly-glu-gly. Apparently the obtained sequence is contaminated because of its high glycine content and its low identity with the synthetic peptides. The scarce residues number does not allow us to compare it with another sequence reported in bioinformatic data banks. | |
| Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C. | |
| 28-08-2003 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis de Maestría en Ciencias en Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales |
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| anguiano_g.pdf | Tesis de Gerardo Alfonso Anguiano Vega | 2.12 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |