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http://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/306| Determinación de las condiciones básicas para el cultivo primario in vitro de células de manto de la madreperla Pinctada mazatlanica (Hanley, 1856) | |
| ALEJANDRO OLIVERA BONILLA | |
| Pedro Enrique Saucedo Lastra | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Pinctada mazatlanica, cultivo in vitro, manto | |
| El género Pinctada es utilizado en el perlicultivo comercial a nivel mundial. En este proceso, un fragmento de manto de la zona paleal de una ostra perlera (donador) es implantado en la gónada de otras ostras (receptores). Sin embargo el método para el cultivo de perlas esféricas es ineficiente. En el presente trabajo se realizó la búsqueda de métodos alternativos al perlicultivo: el cultivo in vitro del manto de P. mazatlanica. Por ello se realizó investigación preliminar dirigida a sentar las bases para el establecimiento de un cultivo primario in vitro de tejido y células del manto de la especie. La presente tesis tiene como objetivo determinar las condiciones básicas para llevar a cabo el cultivo in vitro de células aisladas y explantes del manto, evaluando cinco diferentes formas de disgregación enzimática celular, tres medios de cultivo para permitir la supervivencia de explantes, dos sustratos (con y sin poli-D-lisina) para las células y el manto, cuatro osmolaridades del medio de cultivo para el manto, además de la absorción de calcio del manto in vitro. Se obtuvo que la colagenasa (tipo I con una actividad específica de 414 U/mg) permitió los mejores rendimientos medidos como número de células viables disgregadas a 37°C por 60 minutos. La siembra de células disgregadas se dio mejor en el medio RPMI 1640, mantenido a 37°C con sustrato poli-D-lisina. El cultivo de explantes resultó ser mejor en el medio RPMI 1640 a 60 mM de NaCl, y en estas mismas condiciones se evidenció la absorción de calcio por medio de espectrofotometría de absorción atómica. Se puede concluir que los resultados preliminares generados en la presente investigación proporcionan un panorama claro del rumbo que deben seguir los futuros estudios dentro de este campo tan novedoso de la investigación científica y tecnológica. Se recomienda evaluar otras temperaturas, y utilizar el análisis digital de imágenes como método de cuantificación de procesos importantes como la absorción de calcio, así como realizar este tipo de estudios con la otra especie de ostra perlera mexicana Pteria sterna. The genus Pinctada is used in commercial pearl farming worldwide. In this activity, a piece of mantle tissue from a donor’s paleal zone is implanted within the gonad of other receiver pearl oysters. However, this method has proved to be inefficient in commercial pearling activities. In the present thesis, the in vitro cultivation of mantle tissue from P. mazatlanica was evaluated as alternative method. Preliminary research was aimed for establishing the basis of a primary in vitro culture of cells and tissue of the species. The final goal was to culture cells and explants of the species, testing five methods of enzymatic dissociation, three different culture media, two cell substrates (with and without poly-D-lysine), four different osmolarities of the cell culture medium, as well as calcium intake by mantle tissue in vitro. Our results indicated that collagenase (type I with specific activity of 414 U/mg) yielded the best measured as number of disaggregated viable cells at 37°C for 60 minutes. Disaggregated cells grew better in RPMI 1640 cell medium, maintained at 37°C with poly-D-lysine substrate. Culture of explants resulted better using RPMI 1640 medium at 60mM NaCl, and in this conditions calcium absorption was evaluated by atomic absorption espectrophotometric. Our preliminary results provide a clear overview of the pathway that future studies must follow in this innovative scientific and technologic research field. We recommend trying other temperatures in cell enzymatic dissociation, using a digital image analysis for evaluating calcium absorption, and it would be valuable to conduct this kind of experiments with the other pearl oyster species in Mexico, Pteria sterna. | |
| Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C. | |
| 06-07-2006 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| ZOOLOGÍA MARINA | |
| Versión aceptada | |
| acceptedVersion - Versión aceptada | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis de Maestría en Ciencias en Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales |
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| olivera_a.pdf | Tesis de Alejandro Olivera Bonilla | 1.25 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |