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http://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/2989| Importancia relativa de la tripsina digestiva en el camarón blanco del Pacífico Penaeus vannamei | |
| MONICA BUENDIA PADILLA | |
| Liliana Carolina Rojo Arreola JULIO HUMBERTO CORDOVA MURUETA | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Crustacea, hepatopáncreas, proteasa, RNAi, silenciamiento génico Crustacea, hepatopancreas, protease, gene silencing | |
| "Las peptidasas digestivas son enzimas que hidrolizan las proteínas del alimento, su abundancia e importancia varía entre organismos. En los camarones peneidos el 60% de la hidrólisis es efectuada por las serino peptidasas tripsina y quimotripsina. En la glándula digestiva (GD) del camarón blanco del Pacífico, Penaeus vannamei, se hallan al menos una docena de endopeptidasas; se tienen identificadas al menos tres tripsinas, dos quimotripsinas, y una metalopeptidasa (Mpc1). Una pregunta que surge es por qué hay tal cantidad de peptidasas, y cuál es su importancia relativa en la digestión de la proteína del alimento. Se ha sugerido que, ante la inhibición de la actividad de la tripsina, otras peptidasas del repertorio (especialmente Mpc1) compensan la función. El objetivo general de este trabajo es conocer la importancia relativa de la tripsina digestiva en P. vannamei. Para ello, se utilizó RNAi para silenciar tripsina y se evaluó el efecto tanto en la expresión como en la actividad de tripsinas y otras peptidasas digestivas para determinar si hay compensación a nivel transcripcional, también se midió el efecto en el perfil de aminoácidos (aa) del músculo. La interferencia se produjo mediante inyección de dsRNA de tripsina-2 (dsRNA-Try2) en GD. Los controles negativos incluyeron especímenes no inyectados, inyectados en GD con NaCl 0.9% o con dsRNA-GFP. Se realizaron dos bioensayos (B1-B2), en ambos se cuantificó la expresión génica en GD de las peptidasas tripsina-1, -2, -3, quimotripsina-B1, y Mpc1, mediante RT-qPCR; también se cuantificaron las actividades proteolíticas total y específica (tripsina y quimotripsina), así como la evaluación del perfil de proteínas y bandas de actividad (zimografía). Los resultados de expresión génica del B1, muestran que la tripsina-2 disminuyó, aunque no significativamente, a partir de las 48 horas post-inyección (hpi) del dsRNA-Try2, y hasta las 120 hpi. Este mismo patrón se observó en la expresión génica de la tripsina-1, la quimotripsina-B1, y la Mpc1, e incluso en las actividades proteolíticas. La zimografía de GD de los especímenes experimentales evidenció una disminución en la intensidad de las bandas de actividad correspondientes a las tripsinas, pero principalmente a las correspondientes a la Mpc1. Los resultados fueron similares para el B2, que duró 17 días y consistió en tres inyecciones del tratamiento espaciadas seis días, y tres muestreos (120 h después de cada inyección)..." "Digestive peptidases are enzymes that hydrolyze dietary proteins, and their abundance and importance vary among organisms. In penaeid shrimps, 60% of protein hydrolysis is carried out by the serine peptidases trypsin and chymotrypsin. In the digestive gland (DG) of the Pacific whiteleg shrimp, Penaeus vannamei, at least a dozen endopeptidases have been identified, including three trypsins, two chymotrypsins, and one metallopeptidase (Mpc1). A fundamental question is why there is such a variety of peptidases and what their relative importance is in the digestion of dietary proteins. It has been suggested that when trypsin activity is inhibited, other peptidases in the repertoire (especially Mpc1) compensate for this function. The general objective of this work is to understand the relative importance of digestive trypsin in P. vannamei. To address it, trypsin was silenced through RNAi, the effect on the expression and activity of trypsins and other digestive peptidases was evaluated to determine if there is transcriptional compensation. The effect on the amino acids (AA) profile of the muscle was also determined. Interference was induced by injecting trypsin-2 dsRNA (dsRNA-Try2) into the DG. Negative controls included non-injected specimens, specimens injected with 0.9% NaCl in the DG, or with dsRNA-GFP. Two bioassays (B1-B2) were conducted; in both, gene expression of the peptidases trypsin-1, -2, -3, chymotrypsin-B1, and Mpc1 in the DG was quantified by RT-qPCR. Total and specific proteolytic activities (trypsin and chymotrypsin) were also quantified, as well as the protein profile and activity bands (zymography). Gene expression results from B1 show that trypsin-2 decreased, although not significantly, at 48 hours post-injection (hpi) of dsRNA-Try2 and maintained up to 120 hpi. The same pattern was observed in the gene expression of trypsin-1, chymotrypsin-B1, and Mpc1, as well as in proteolytic activities. Zymography of the DG from experimental specimens showed a decrease in the intensity of the activity bands corresponding to trypsins, but mainly those corresponding to Mpc1. The results were similar for B2, which lasted 17 days and consisted of three injections spaced six days apart, and three samplings (120 hours after each injection)..." | |
| Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S. C. | |
| 2024 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| ENZIMOLOGIA | |
| Versión aceptada | |
| acceptedVersion - Versión aceptada | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis de Doctorado en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales |
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| buendía_m TESIS.pdf | Tesis de Mónica Buendía Padilla | 6.89 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |