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Desarrollo de una metodología de edición genómica basada en la entrega in ovo de Cas9 en Penaeus vannamei
Jesús Guadalupe Castro Obeso
RICARDO PEREZ ENRIQUEZ
Raúl Antonio Llera Herrera
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
CRISPR/Cas9, ReMOT, Penaeus vannamei, crustáceos, inmunohistología, vitelogenina
crustceans, immunohistology, vitellogenin
"Penaeus vannamei, conocido como camarón blanco, es la especie de camarón más producida a nivel mundial para el consumo humano. Debido a su importancia económica y por lo tanto social, continuamente se desarrollan líneas de investigación que puedan tener un impacto positivo en la producción de esta especie. Recientemente, el sistema CRISPR/Cas9, una herramienta de edición genómica de vanguardia, en conjunto con la tecnología de transducción ovárica mediada por receptor (ReMOT), han demostrado ser una estrategia exitosa para generar variantes alélicas en insectos. En este estudio se evaluó la actividad endonucleasa in vitro de la proteína Cas9-PvVg. Así mismo, con la finalidad de evaluar su internalización hacia los ovocitos, se realizaron ensayos en hembras vitelogénicas de P. vannamei, inyectando intramuscularmente una mezcla de la proteína con cloroquina, la cual es un agente disruptor endosomal. Evaluaciones inmunohistológicas en muestras de tejido gonadal 12 h post-inyección, evidenciaron que la proteína Cas9-PvVg es capaz de internalizarse en los ovocitos, incluso translocarse al núcleo. Aunque estudios moleculares posteriores son necesarios para confirmar estos resultados, la técnica CRISPR/Cas9-ReMOT desarrollada en este estudio muestra ser una herramienta prometedora para ser empleada en aproximaciones de edición genómica en P. vannamei y potencialmente en crustáceos."
"Penaeus vannamei, commonly known as white shrimp, is the most globally produced shrimp species for human consumption. Due to its economic and, consequently, social significance, ongoing research efforts aim to positively impact the production of this species. Recently, the CRISPR/Cas9 system, a cutting-edge genomic editing tool, in conjunction with Ovary Transduction Receptor-Mediated Technology (ReMOT), has proven to be a successful strategy for generating allelic variants in insects. In this study, the in vitro endonuclease activity of the Cas9-PvVg protein was evaluated. Additionally, to assess its internalization into oocytes, experiments were conducted on vitellogenic females of P. vannamei by intramuscularly injecting a mixture of the protein with chloroquine, an endosomal disruptor agent. Immunohistological evaluations of gonadal tissue samples 12 hours post-injection revealed that the Cas9-PvVg protein can internalize into oocytes, even translocating into the nucleus. Although further molecular studies are necessary to confirm these results, the CRISPR/Cas9-ReMOT technique developed in this study proves to be a promising tool for use in genomic editing approaches in P. vannamei and potentially in crustaceans."
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S. C.
2024
Tesis de maestría
Español
GENÉTICA ANIMAL
Versión aceptada
acceptedVersion - Versión aceptada
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