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Estrategia bionanotecnológica para el combate del síndrome de la mancha blanca basada en la técnica de phage display
MERCEDES GORETTE SOLIS LUCERO
Felipe de Jesús Ascencio Valle
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
WSSV; vacuna; despliegue en fago
The white spot syndrome virus (WSSV) is the most important viral pathogen for farmed shrimp and responsible of mass mortalities with huge economic losses. The WSSV VP28 protein, one of the most abundant in virions, is able to protect organisms against infection. Genetically engineered phages serve as antigenic protein or peptide vehicles, so these viral nanoparticles are used as bionanovaccine with numerous advantages. The aim of this study was to develop and evaluate a bionanovaccine against WSSV, using the filamentous phage M13 as carrier of the vaccine protein VP28. To achieve this objective, the full-length gene encoding VP28 protein was cloned into pG8SAET vector allowing protein display in fusion with M13 pVIII structural protein. With helper phage M13K07 aid the viral particle was rescued from TG1 cells transformed with VP28-pG8SAET and empty pG8SAET vectors, respectively. The VP28 vaccine was expressed and displayed in multiple copies on virion surface. The M13-fused VP28 protein (VP28-M13) was capable to bind to hemocyte membranes in an ELISA assay. The bionanovaccine VP28-M13 or M13 were intramuscularly administrated to L. vannamei shrimps (2 x 1010 cfu/shrimp) and challenged with WSSV 48 h later. The relative percentage survival (RPS) of the vaccinated group was 44.99% with respect to the unvaccinated group. Phenoloxidase and superoxide dismutase activity was measured at eight and 48 h post-vaccination with no significant difference between groups in times evaluated. A second bioassay was performed with forced oral administration of a single dose of VP28-M13 (4 x 1010 cfu/shrimp), M13 (4 x 1010 cfu/shrimp) and TBS. The groups were divided into two subgroups. The first set of subgroups was challenged 3 dpv and the second one 14 dpv. For 3 dpv challenge, PSR values of 28.57% and 20.83% were observed, compared with the positive control group (100% mortality) in VP28-M13 and M13, respectively. The relative expression evaluation of the immune system genes prior to challenge showed an increase in anti-lipopolysaccharide factor (ALF1) and SOD expression 3 dpv for VP28-M13 and M13 groups. [...]
El virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV) es el patógeno viral más importante del camarón en cultivo y el responsable de mortalidades masivas con grandes pérdidas económicas. La proteína VP28 del WSSV, una de las más abundantes en el virión, es capaz de proteger a los organismos contra la infección. Los fagos modificados por ingeniería genética sirven como vehículos de proteínas o péptidos antigénicos de forma que estas nanopartículas virales son utilizadas como bionanovacunas con numerosas ventajas. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y evaluar una bionanovacuna contra el WSSV, usando al fago filamentoso M13 como acarreador de la proteína vacunal VP28. Para ello, el gen completo que codifica para VP28 fue clonado en el vector pG8SAET que permite el despliegue de proteínas en fusión a la proteína estructural pVIII del M13. Con la ayuda del fago ayudador M13K07, la partícula viral fue rescatada de células TG1 transformadas con el vector VP28-pG8SAET y el vector vacío pG8SAET, respectivamente. La vacuna VP28 fue expresada y desplegada en múltiples copias sobre la superficie del virión. La proteína VP28 fusionada al M13 (VP28-M13) fue capaz de unirse a las membranas de hemocitos en un ensayo de ELISA. La bionanovacuna VP28-M13 o el M13 fueron administrados intramuscularmente a camarones L. vannamei (2x1010 ufc/camarón) y 48 h después fueron retados con WSSV. El porcentaje de sobrevivencia relativa del (PSR) del grupo vacunado fue de 44.99% respecto al grupo sin vacunar. Se midió la actividad de la fenoloxidasa y superóxido dismutasa (SOD) a las 8 y 48 h post-vacunación (hpv) sin que se encontraran diferencias significativas entre grupos en los tiempos evaluados. Se realizó un segundo bioensayo con la administración oral forzada de una dosis única de VP28-M13 (4 x 1010 ufc/camarón), M13 (4 x 1010 ufc/camarón) y TBS. Los grupos fueron subdivididos en dos subgrupos. El primer conjunto de subgrupos fue retado 3 dpv y el segundo 14 dpv. Para el reto 3 dpv, se observaron PSR de 28.57% y 20.83%, comparados con el control positivo (100% mortalidad), en los grupos VP28-M13 y M13 respectivamente. La evaluación de la expresión relativa de genes del sistema inmune previo al reto mostró un incremento en la expresión de factor anti-lipopolisacáridos (ALF1) y SOD 3 dpv para los grupos VP28-M13 y M13 [...]
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.
20-09-2016
Tesis de doctorado
Español
VIROLOGÍA
Appears in Collections:Tesis de Doctorado en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales

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