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http://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/2101| Caracterización del DNAc de la hormona de crecimiento de Lutjanus peru y su producción en Chlorella sorokiniana y Pichia pastoris | |
| HECTOR DANIEL GARZA AVELAR | |
| GRACIA ALICIA GOMEZ ANDURO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| DNAc, hormona de crecimiento, transcriptoma, P. pastoris, C. sorokiniana, L. peru. growth hormone, transcriptome | |
| "El huachinango (Lutjanus peru), es un pez con gran potencial comercial que habita desde las costas del sur de California hasta el norte de Perú, su cultivo se ha ido intensificando a medida que se ha cerrado su ciclo de cultivo en cautiverio observando que obtiene su madurez sexual a los 3 años. Para la obtención de cultivos de mayor peso y talla se ha utilizado la aplicación de hormona de crecimiento (GH del inglés de Growth Hormone) recombinante, lo que ha llevado al desarrollo de patentes con un gran potencial comercial. Para la producción de GH se utilizan sistemas de producción entre los que destaca E. coli por su facilidad de manipulación, el conocimiento de su genoma y los costos de producción. Sin embargo presenta desventajas a la hora de realizar modificaciones post-traduccionales, esenciales para la actividad biológica de las GH. Por otra parte, organismos como P. pastoris y C. sorokiniana representan una alternativa viable para la producción de GH recombinantes, entre otros metabolitos de interés industrial, pues ya se ha probado que tienen la capacidad de producir hormonas de crecimiento de mamíferos (humano, perro, gato, caballo, cerdo, entre otros) y de peces con actividad biológica. Es por ello que el objetivo de este trabajo fue el de caracterizar el DNAc de la hormona de crecimiento de L. peru (LpGH) y producirlo empleando Pichia pastoris y Chlorella sorokiniana como sistemas para la obtención de proteínas recombinantes. A partir de RNA total de pituitaria de L. peru, se aisló un DNAc de 1025 pb que codifica para una proteína de 203 aa, 23 KDa y punto isoeléctrico de 6.89, el gen se obtuvo de gDNA y consta de 2 Kb de regiones intrón. La región codificante de la proteína madura se insertó en el vector de clonación pMDC32 para la transformación por balística de C. sorokiniana y pPIC9 para la transformación de P. pastoris. Se comprobó mediante pruebas moleculares (PCR) la transformación genética de ambos sistemas y se evaluó la producción de la proteína recombinante en geles de poliacrilamida al 12% teñido con azul de coomassie y la detección de la misma por western blot. Por lo que este trabajo sienta las bases para una aplicación de la LpGH para determinar el efecto de la misma para propósitos prácticos." "The red snapper (Lutjanus peru), is a high commercial potential fish that inhabits from southern California to northern Peru. Its culture has been intensified as it has closed its growing cycle in captivity, where it has been observed it reaches sexual maturity in 3 years. To produce crops with higher weight and height the recombinant growth hormone (GH) has been applied, leading to the development of commercial patents. To produce GH production systems as E. coli have been used because of its easy handling, knowledge of its genome, and production costs. However, it has the disadvantage of making post-translational modifications, essential to GH biological activity. Moreover, organisms such as Pichia pastoris and Chlorella sorokiniana represent a viable alternative for the production of recombinant GH, among other metabolites of industrial interest, as it has already been proven they have the ability of producing mammalian (human, dog, cat, horse, pig, etc.) and fish growth hormones with biological activity. That is why the aim of this study was to characterize the DNAc of L. peru growth hormone (LpGH) and produce it using P. pastoris and C. sorokiniana as systems for the production of recombinant proteins. From the total RNA of the pituitary gland of L. peru a 1025 bp DNAc encoding a protein of 203 aa, 23 kDa and isoelectric point of 6.89 was characterized. The gene was obtained from gDNA and had 2 Kb of intron regions. The coding region of the mature protein was inserted into the pMDC32 and pPIC9 cloning vector for ballistic transformation of both C. sorokiniana P. pastoris, respectively. The genetic transformation of both systems was checked by molecular tests (PCR) and the production of recombinant protein was evaluated in polyacrylamide gels at 12% coomassie blue stain and the detection thereof by western blot. This work provides the basis for an application of the LpGH to determine its effect for practical purposes." | |
| Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C. | |
| 2015 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| PISCICULTURA | |
| Versión aceptada | |
| acceptedVersion - Versión aceptada | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis de Maestría en Ciencias en Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales |
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