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http://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/192| Silenciamiento del gen endógeno Rab7 en Litopenaeus vannamei mediante RNA de interferencia | |
| PINDARO ALVAREZ RUIZ | |
| FRANCISCO JAVIER MAGALLON BARAJAS CLAUDIO HUMBERTO MEJIA RUIZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| WSSV; Rab7; RNAi | |
| El virus de la mancha blanca (WSSV) sigue siendo la principal amenaza para los cultivos de camarón en todo el mundo. Hasta el momento el RNA de interferencia (RNAi) dirigido al bloqueo de genes virales, es la herramienta antiviral más efectiva para contrarrestar su efecto. El RNAi es un mecanismo celular que se inicia cuando un RNA de doble cadena (dsRNA) largo, es procesado a RNAs pequeños que se incorporan a complejos efectores de silenciamiento y son guiados a secuencias complementarias blanco en el RNA mensajero (mRNA) para degradarlo de manera específica. Sin embargo, las evidencias indican que en ausencia de mRNAs objetivo, la potencia del efecto disminuye gradualmente. Una posible solución a este problema es dirigir el silenciamiento a genes endógenos, así, la fuente de mRNAs sería permanente. En este sentido, las proteínas Rab, pequeñas GTPasas que regulan el transporte, acoplamiento y fusión de vesículas durante la endocitosis de partículas, incluyendo al WSSV que utiliza esta vía para infectar las células, es un buen candidato para combatir al virus. El descubrimiento de Rab7 en Penaeus monodon (PmRab7) y su silenciamiento, otorga protección contra WSSV en camarones juveniles de P. monodon y Litopenaeus vannamei. Sin embargo, no hay información sobre la existencia de un homologo a Rab7 en L. vannamei ni del efecto antiviral que provoca su silenciamiento en reproductores de camarón. Además, se desconoce la duración del efecto antiviral y las consecuencias de su silenciamiento para el organismo. En el presente estudio se aisló y clonó una secuencia homologa a Rab7 en reproductores de camarón blanco (L. vannamei) de México (LvRab7). La secuencia de LvRab7 mostró una homología > 94% con las de otras especies de camarones. El silenciamiento de LvRab7 mediante dsRNA en reproductores de camarón retrasó la mortalidad cuando los camarones fueron retados contra una dosis viral alta. En contraste, mostró un efecto antiviral potente contra una dosis viral baja y este fue independiente a la cantidad de dsRNA aplicada. Por otra parte, el silenciamiento de LvRab7 fue progresivo y perdurable, pero los camarones tratados, mostraron evidentes signos de deterioro al pasar el tiempo y en algunos casos parece ser letal [...] White spot syndrome virus (WSSV) still is the main threat for shrimp culture worldwide. Until now RNA interference (RNAi) directed against viral genes is the most effective antiviral tool against viral infection and its effect. RNAi is a cellular mechanism that begins when a long double-stranded RNA (dsRNA) is processed into small RNAs that are taken up by silencing effectors and are guided to their complementary sequences in the target messenger RNA (mRNA) in order to degrade it in a specific manner. Nonetheless, it is known that in absence of a target mRNA the power of the effect is gradually diminished. A possible solution would be to direct the RNA silencing towards shrimp endogenous genes, so a permanent source of mRNA is achieved. Rab proteins are small GTPases which regulate the transport, budding and fusion of vesicles during endocitosis of different particles, including viruses that use this pathway during cell infection such as WSSV. Therefore silencing Rab proteins might be a good strategy against virus infection. A Rab7 protein was found in Penaeus monodon (PmRab7) and its silencing by RNAi showed protection against WSSV challenge in P. monodon and L. vannamei juvenile shrimp. Nonetheless, no information is yet available on the presence of a homologous Rab7 protein in L. vannamei or its antiviral effect upon silencing in shrimp brooders. Moreover, it is not known the duration of its antiviral effect or the consequences of its silencing inside the animal. In the present work, a homologous Rab7 sequence was found in Pacific white shrimp (L. vannamei) brooders from Mexico (LvRab7). Such a sequence showed a > 94% homology to that of other shrimp species. Silencing LvRab7 by dsRNA in brooders delayed mortality when shrimp were challenged with a high viral dose. In contrast, a potent antiviral effect was observed upon a low viral dose and the effect was dsRNA dose-independent. Moreover, silencing LvRab7 was lasting and progressive but treated shrimp showed clear signs of damage as time post treatment increased and in some cases it could be lethal [...] | |
| Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C. | |
| 11-12-2012 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| OCEANOGRAFÍA ACUICULTURA MARINA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis de Doctorado en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales |
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| alvarez_p.pdf | Tesis de Píndaro Alvarez Ruiz | 4.05 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |