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http://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/1759| Detección de agentes virales en ostión Japonés (Crassostrea gigas) | |
| Valérie Barbosa Solomieu | |
| RICARDO VAZQUEZ JUAREZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Ostión, Crassostrea gigas, virus, diagnóstico, Herpesviridae, PCR, hibridación in situ, técnica de detección Oyster, diagnosis, in situ hybridisation, detection method | |
| "Las infecciones virales, capaces de provocar mortalidades masivas de peces, camarón y bivalvos, constituyen una amenaza real para la producción acuícola. En los años setenta, enfermedades provocadas por iridovirus condujeron a la eliminación del ostión Portugués (Crassostrea angulata) de importantes zonas de cultivo en Europa. De manera más reciente, se han detectado infecciones por virus de tipo herpes en varias especies de moluscos alrededor del mundo. Este tipo de infecciones han sido asociadas con mortalidades elevadas en Ostrea edulis y Crassostrea gigas. La purificación del virus herpes de ostreidos (OsHV-1) permitió su caracterización y el desarrollo de diversas técnicas de detección específica entre las cuales destacan dos herramientas moleculares : la PCR y la hibridación in situ (HIS). Estos protocolos, si bien han demostrado su eficiencia, no han sido sometidos a un proceso de validación stricto sensu. Por tales motivos, se llevaron a cabo varias series de análisis de muestras de colección que contribuyen a la comparación y la evaluación de ambas técnicas. Los resultados obtenidos con tejidos fijados e incluídos en parafina revelaron que la técnica más eficaz para el diagnóstico de OsHV-1 es la PCR con primers que amplifican fragmentos pequeños (<200 pb) de una región repetida del genoma viral. Adicionalmente, se observó que la fijación y el almacenamiento de este tipo de muestras son etapas esenciales que deben ser optimizadas para que la interpretación de los resultados sea posible. Por otra parte, ensayos inter-laboratorios demostraron la reproductibilidad de los resultados de la PCR y la necesidad de una mayor estandarización del protocolo de HIS empleado. Mas allá de su evaluación, estas herramientas moleculares fueron empleadas para explorar dos hipótesis acerca de OsHV-1. En primer lugar, la detección de OsHV-1 en tres generaciones sucesivas de ostión Japonés (adultos reproductores y larvas) proporcionó datos que refuerzan la hipótesis de una transmisión vertical de este virus y sugieren la existencia de un mecanismo de defensa o resistencia contra la infección viral transmitido por las hembras a su progenie. En segundo lugar, la detección de OsHV-1 en una cantidad limitada de muestras de C. gigas de México indica que este tipo de infecciones pueden ser ubicuas. Sin embargo, se requieren muestreos y análisis adicionales para confirmar este resultado..." "Viral infections, capable of provoking massive mortality in fish, shrimp and bivalves constitute a real threat for aquacultural production. In the 70s, iridoviral diseases lead to the almost complete elimination of the Portuguese oyster (Crassostrea angulata) from European Atlantic coasts. More recently, herpesviral infections have been detected in various mollusk species around the world. Such infections have been associated with high mortality rates in Ostrea edulis and Crassostrea gigas. The purification of oyster herpesvirus 1 (OsHV-1) allowed its characterization and the development of various techniques for its specific detection, among which two molecular tools: PCR and in situ hybridisation (ISH). Although they have proved to be efficient, these techniques have not undergone a proper validation process. The analysis of a series of reference samples allowed the comparison and evaluation of both techniques. The results obtained with fixed, paraffin-embedded tissues showed that the most efficient technique for the detection of OsHV-1 is PCR with primers that amplify small fragments (<200 pb) of a repeated region of the viral genome. Moreover, it was observed that fixation and storage of this kind of samples are essential steps that ought to be optimized in order for results to be interpretable. An inter-laboratory assay (ring trial) showed the reproducibility of PCR results and the necessity to further standardize the available ISH protocol. In addition to their evaluation, these molecular techniques were used to further explore two hypothesis concerning OsHV-1. The screening of this virus across three successive generations of Pacific oysters (parental oysters and their progeny) furnished data that seem to strengthen the hypothesis of a vertical transmission and suggest that female oysters may transmit a resistance or defense mechanism against viral infection to their offspring. Concerning the presence of OsHV-1 in other countries, PCR gave positive results in a restricted number of Pacific oyster samples from Mexico. However, further sampling and analysis are required to confirml thois result . Due to the impact that both iridoviruses and birnaviruses have on cultured fish and shellfish, PCR detection procedures by PCR and/or RT-PCR with primers tragetting conserved regions have been designed..." | |
| Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C. | |
| 2004 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| VIROLOGÍA | |
| Versión aceptada | |
| acceptedVersion - Versión aceptada | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis de Doctorado en Ciencias en el Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales |
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| barbosa_v.pdf | Tesis de Valérie Barbosa Solomieu | 4.8 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |