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Identificación molecular de larvas de moluscos gasterópodos mediante el gen 18S ARNr
ALEJANDRA ARCINIEGA DE LOS SANTOS
RICARDO PEREZ ENRIQUEZ
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
Marcadores moleculares; moluscos gasterópodos; Molecular Beacon; RFLP; Disociación de alta definición
Muchas especies marinas poseen un estadio larvario pelágico que es morfológicamente distinto y mucho más chico que la forma adulta. Entre ellos resaltan los moluscos gasterópodos por su importancia económica como fuente de alimento, ornamentales y de compuestos farmacéuticos. Entender los procesos que afectan tanto a la supervivencia como el transporte de éste estadio y su influencia en la distribución espacial, dinámica poblacional, estrategias de migración y evolución de las especies, representa uno de los retos principales en Ecología Marina. Los estudios de dinámica larvaria son importantes como insumo para el manejo pesquero y diseño de prácticas acuícolas. Sin embargo, estos estudios enfrentan el enorme reto de la identificación precisa de especies, por lo que en el presente trabajo se explora la factibilidad de incorporar herramientas moleculares como alternativa a la identificación morfométrica tradicional. Se evaluaron cuatro herramientas moleculares basadas en la amplificación por PCR del gen 18S ARNr. El uso potencial de sondas moleculares tipo “Molecular Beacon” (1), el análisis de fragmentos de restricción (RFLPs) (2) y el análisis de Disociación de Alta Resolución (HRM) (3) fueron dirigidos a la identificación de especies de gasterópodos de elevada importancia comercial (abulones); en tanto que el análisis total de polimorfismos a partir de secuencias parciales (4) se dirigió a la caracterización de larvas de moluscos gasterópodos de muestras de plancton obtenidas de dos localidades de la costa occidental del Estado de Baja California Sur (La Bocana y Cabo Tosco), comparando sus secuencias con la base de datos de ADN GenBank. La sonda tipo Molecular Beacon presentó señales diferenciales entre muestras de ejemplares adultos de Haliotis sp. y Megastraea sp., en tanto que el análisis HRM mostró curvas de disociación distintivas entre los géneros Haliotis, Fissurella y Megathura. El análisis de RFLPs en ejemplares adultos de Haliotis corrugata, Fissurella volcano, Megathura crenulata, Tegula eisenii y Megastraea undosa, basados en la digestión con la enzima DdeI mostró también una clara diferencia en los tamaños de fragmentos obtenidos y por ende de dichas especies. Sin embargo, el análisis de larvas requirió además de la digestión con la endonucleasa Sau3AI, para la diferenciación de haliótidos de otros moluscos gasterópodos presentes en las muestras [...]
Many marine species, such as gastropod mollusks, have larval pelagic stages that are much smaller and morphologically distinct to their adult counterparts. These species are important due to their economical value as protein source, ornamentals, and origin of some pharmaceutical compounds. The understanding of the processes that affect survival and spatial distribution at the larval stage, the population dynamics, migration strategies, and the species evolution represent one of the most important challenges in Marine Ecology. The study of the larval dynamics is of the utmost importance for fisheries management and aquaculture practices design. However, these are limited by the great difficulty of the precise identification of the species at the early stages. On this basis, the objective of the present research is to explore the feasibility of the use of molecular tools as an alternative to the traditional morphometric identification. Four molecular tools based on the amplification by PCR of the 18S rRNA were evaluated. The use of “Molecular Beacons” as molecular probes (1), the Restriction Fragment Length Polimorphism (RFLPs) (2), and the High Resolution Melting (HRM) (3) techniques were directed to the identification of commercial gastropods. The analysis of partial gen sequences (4) of gastropod larvae collected from plankton tows from two sites on the west coast of the Baja California State (La Bocana and Cabo Tosco), was done by comparing these sequences with those available in the GenBank database. The Molecular Beacon probe showed signals for the differentiation of adults of Haliotis sp. and Megastrea sp., meanwhile the HRM presented dissociation curves that distinguished Haliotis, Fissurella, and Megathura genera. The RFLP analysis in adult specimens based on the digestion with the enzyme DdeI also showed a clear differentiation among Haliotis corrugata, Fissurella volcano, Megathura crenulata, Tegula eisenii, and Megastraea undosa. Nevertheless, because the analysis done in larvae was inconclusive, it required the additional use of the endonuclease Sau3AI to be able to separate haliotids from the other gastropod mollusks in the samples [...]
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.
14-03-2012
Tesis de maestría
Español
ZOOLOGÍA MARINA
Appears in Collections:Tesis de Maestría en Ciencias en Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales

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