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http://cibnor.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1001/1707| Subclonación de la secuencia que codifica la Cu,Zn SOD-1 en el vector de expresión pPICZ(∝) y producción de la proteína recombinante | |
| Reyna de Jesús Romero Geraldo | |
| NORMA YOLANDA HERNANDEZ SAAVEDRA | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| P. pastoris, proteína recombínante, Cu,Zn SOD Pichia pastoris, Recombinant proteins, Superoxide dismutase Cu,Zn | |
| "Actualmente se emplean microorganismos manipulados genéticamente para portar y expresar genes heterólogos con los que es posible producir proteínas recombinantes de importancia biomédica y/o industrial. El éxito para la expresión de proteínas recombinantes radica en las características y propiedades de la proteína, así como el origen del sistema de expresión utilizado. En los años 80s el uso de levaduras no convencionales (Pichia pastoris, Hansenula polymorpha, etc.) como sistema de expresión de proteínas de origen eucariota ha sido eficiente, debido a que combina características de ruta secretora de proteínas de eucariotas superiores y, al mismo tiempo, como organismo unicelular es fácil de manipular y cultivar en medios no complejos. El modelo es atractivo por sus altos rendimientos en la producción de biomasa y, frecuentemente, es posible el escalamiento del proceso de fermentación para la sobre-expresión de producto recombinante. La enzima superóxido dismutasa tipo Cu,Zn (Cu,Zn SOD), pertenece a una familia de metaloproteínas que catalizan la dismutación del anión superóxido a oxígeno molecular y peróxido de hidrógeno. Mediante su actividad catalítica reduce los daños que puede ocasionar el radical superóxido en algunas biomoléculas (ADN, proteínas, lípidos). La enzima tiene un amplio potencial de aplicación dentro del sector biomédico como: antiinflamatorio, medicamento auxiliar en la preservación de órganos susceptibles a transplante, en el tratamiento de ulceras, artritis reumatoide, etc. Además, ha dado excelentes resultados dentro de la industria cosmetológica al retardar el envejecimiento de la piel y como protector contra los efectos de la radiación solar. La Cu,Zn SOD de la levadura marina Debaryomyces hansenii, presenta mayor actividad específica y estabilidad al compararla con la correspondiente obtenida de otras fuentes, como el hígado y los eritrocitos de bovino, y Saccharomyces cerevisiae. La expresión de la secuencia codificante dh sod-1 (Cll5), como proteína recombinante (Cu,Zn SOD de D. hansenii ), fué obtenida al utilizar el sistema de expresión de P. pastoris (levadura metilotrófica), que utiliza los vectores integrativos pPICZ (intracelular) y pPICZ(∝) (extracelular). A la secuencia dh sod-1 se le inserto la caja de Kozac mediante amplificación por PCR, utilizando oligos específicos. El producto se clonó en el vector pCR2.1 utilizando como hospedero E. coli..." "Genetically modified microorganisms are currently employed to carry and express heterologous genes coding proteins of medical and commercial importance. The success of expressing a recombinant protein relies on the characteristics and quality of a protein as well as expression systems. In the 80s, non-conventional yeasts (Pichia pastoris, Hansenula polymorfa, etc) were successfully used as expression systems for higher eukaryotic proteins. Those systems are efficient both because of secretory routes of proteins similar to that of eukaryotes and the ease of manipulation due to its unicellular nature. Additional advantage is that they grow on non-complex media. This model is attractive because of the high biomass production and the feasibility to scale up by frequent fermentation.The Cu,Zn superoxide dismutase (Cu,Zn SOD) enzyme belongs to the family of metaloproteins that catalyzes dismutation of superoxide anion into molecular oxygen and hydrogen peroxide. As a result, the damaging effect of superoxide radical on biomolecules (DNA, proteins, lipids) is reduced. This property enables the possible application of this enzyme in biomedical fields: as anti-inflammatory drug, in the preservation of transplant organs, treatment of ulcers, rheumatoid, arthritis, etc. Besides, it has provided satisfactory results in the cosmetic industry by delaying the aging of skin and also protecting it from the effects of solar radiation. Among various sources, the stability and specific activity of the Cu,Zn SOD from the yeast Debaryomyces hansenii was proved to be superior to SOD obtained from bovine liver, erythrocytes and the yeast Saccharomyces cerevisiae. The sequence encoding dh sod-1 (Cu,Zn SOD) from D. hansenii was expressed in P. pastoris, a methylotrophic yeast that uses the integrative expression vectors pPICZ (intracellular) and pPICZ(∝) (extracellular), in the following way through PCR amplification. the Kozac box was into the sequence of dh sod-1 by using specific oligonucleotides. The Kozac integrated product was cloned in the vector pCR2. l utilizing the host E. coli. From the clone, the fragment coding dh sod-1 (Cu,Zn SOD) fragment was digested with Eco Rl and subsequently subcloned in the Eco Rl sites of the integrative vectors pPICZ and pPICZ(∝). Finally, the fragment orientation was verified by restriction analysis with Kpn l..." | |
| Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S. C. | |
| 2001 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| PROTEÍNAS | |
| Versión aceptada | |
| acceptedVersion - Versión aceptada | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis de Maestría en Ciencias en Uso, Manejo y Preservación de los Recursos Naturales |
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