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Desarrollo de cepa de levadura productora de factores recombinantes que estimulen el sistema de defensa contra infecciones bacterianas
CLAUDIA CELINA LÓPEZ BOLAÑOS
NORMA YOLANDA HERNANDEZ SAAVEDRA
Felipe de Jesús Ascencio Valle
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
Saccharomyces cerevisiae, H. pylori, vacuna, expresión, antígeno, HSBPs
Vaccine, expression, antigen, HSBPs
"Proteínas de membrana externa y otros componentes de superficie de Helicobacter pylori, son las principales moléculas reconocidas por el sistema inmune. El desarrollo de vacunas terapéuticas contra antígenos específicos de H. pylori, ha resultado en beneficios parciales. Se reconoce que el uso de terapias alternativas, el estudio de nuevos antígenos y el desarrollo de nuevas vías de administración, permitirán en un futuro cercano contribuir a la prevención de enfermedades gastrointestinales causadas por esta bacteria. Por tanto, el objetivo del presente trabajo fue estudiar el uso potencial de Saccharomyces cerevisiae para el desarrollo de vacunas orales, que produzcan proteínas antigénicas de membrana externa de H. pylori, involucradas en la adhesión a componentes gastrointestinales. Con la finalidad de diseñar y construir levaduras recombinantes con factores de adhesión de H. pylori, la presente tesis se enfocó en tres objetivos particulares: A) identificar proteínas de membrana de H. pylori 25 que reconozcan a sulfato de heparina (HSBPs), implicadas en la adhesión a células epiteliales, B) clonar y caracterizar molecularmente a los genes que codifican para dichas adhesinas y, C) construir cepas de S. cerevisiae recombinantes que expresen a estas adhesinas antigénicas. Como resultados, se identificó a dos proteínas de membrana externa en la cepa de H. pylori 25, de peso molecular aparente de 47 y 51 kDa, que se denominaron HSBP47 y HSBP51. Ambas proteínas mostraron afinidad por sulfato de heparina, propiedad comúnmente asociada a adhesinas bacterianas. Anticuerpos policlonales producidos contra HSBP47 y HSBP51, inhibieron significativamente la adhesión de H. pylori 25 a células epiteliales in vitro, lo que sugiere que HSBP47 y HSBP51 están implicadas en el proceso de adhesión. Mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), se amplificaron fragmentos parciales de los genes hsbp47 y hsbp51. Se obtuvo un segmento del gen hsbp47 de 605 pb que codifica para un fragmento de 209 aa. La secuencia de aminoácidos deducida a partir de la secuencia nucleotídica indica que el gen hsbp47 tiene un dominio conservado similar al factor de elongación EF-Tu. Por otro lado, para el gen hsbp51 se obtuvo un fragmento de ~ 950 pb el cual revela una identidad del 67% con una proteína hipotética de Y. pseudotuberculosis y del 40% con una proteína hipotética de H. pylori J99..."
"Helicobacter pylori outer membrane proteins and other surface components are likely targets for recognition by host immune system. Vaccines produced against particular antigens have shown partial beneficial results. It is recognized that alternative therapies, studies on the characterization of new antigens, and alternatives in the administration via, will contribute to prevent gastrointestinal diseases caused by H. pylori. Thus the aim of this study was to explore the potential use of Saccharomyces cerevisiae as oral vaccine, through the expression of recombinant antigenic outer membrane proteins of H. pylori. These proteins recognize heparan sulfate and are involved in adhesion to gastrointestinal components. In order to design and construct recombinant yeast expressing adhesion factors from H. pylori, this thesis focused on the following particular objectives: A) to identify outer membrane proteins from H. pylori 25 that bind heparan sulfate, involved in adhesion to epithelial cells (adhesins); B) molecular cloning and characterization of genes encoding for these adhesins; C) construction of recombinant strains of S. cerivisiae expressing the antigenic adhesins. It was identified two outer membrane proteins (OMPs) from H. pylori of relative molecular weight 47.2 and 51 kDa, called HSBP47 and HSBP51. Both proteins showed affinity for heparan sulfate, property commonly associated to bacterial adhesion. Polyclonal antibodies produced against HSBP47 and HSBP51 significantly inhibited adherence of H. pylori 25 to epithelial cells in vitro, suggesting HSBP47 and HSBP51 proteins are involved in their adhesion. Through a polymerase chain reaction (PCR) the hsbp47 and hsbp51 genes were amplified. A 605 bp fragment of the hsbp47 gene encoding a 209 aa polypeptide was obtained. The deduced amino acid sequence indicates that hsbp47 has retained a domain of elongation factor Tu (EF-Tu). While from the hsbp51 gene a fragment of ~ 950 bp was obtained which showed a 67% identity with a hypothetical protein from Y. pseudotuberculosis and 40% with a H. pylori J99 hypothetical protein..."
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.
2009-01
Tesis de doctorado
Español
VACUNAS
Versión aceptada
acceptedVersion - Versión aceptada
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